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将E18大鼠胚胎来源的海马神经元接种于NeoBento™的培养通道1（Culture Channel 1），皮层神经元接种于培养通道3（Culture Channel 3），构建体外共培养体系。通道预先包被聚-D-赖氨酸（PDL）与层粘连蛋白（laminin），以促进神经元的黏附、生长及神经网络的逐步成熟。培养过程为期21天，期间每周更换培养基三次，以维持适宜的生长环境。
为评估神经元的状态和成熟度，使用β-III-微管蛋白（β-III-tubulin）和DAPI对细胞形态进行可视化染色，并使用MAP2对神经元树突进行标记，以评价其成熟情况。同时，在第7、14和21天使用MEA进行电生理记录，测量神经元自发放电活动。
A. 大鼠海马神经元（Culture Channel 1）和皮质神经元（Culture Channel 3）的免疫荧光染色图。结果显示，神经元成功附着于培养通道，并能够延伸出轴突。DAPI标记细胞核（蓝色），β-III-微管蛋白标记胞体与轴突（绿色），MAP2标记树突（红色），比例尺500µm
B. 第15天大鼠神经元共培养体系的明场图，可见神经元轴突明显延伸
C. 第7、14和21天共培养体系的光栅图（记录时长为300秒）。神经网络自第14天起出现同步化放电活动，并在第21天达到更显著的同步水平，表明网络功能的逐步成熟
D. 第7、14和21天共培养体系中，培养通道与连接微通道的平均放电频率（MFR）对比。结果显示，MFR随培养时间显著上升。第14天时，连接微通道中已检测到较高的自发性电活动（0.8 spikes/s），而培养通道中的MFR为0.3 spikes/s，表明连接微通道内轴突通路的功能发育可能更快
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