2021年7月6日，来自荣昌生物的李壮林博士和ACROBiosystems的张智涛博士给大家分享了关于ADC药物开发策略、创新技术以及工艺放大质控关键点的精彩内容，收到大家积极反馈，小编在这里汇总了直播过程中的Q&A。别犹豫，快来看看有没有你关注的ADC开发质控过程中的关键点吧~
李壮林博士
荣昌生物副总裁、总工程师
Q：ADC偶联环节以及后续纯化步骤倾向于使用一次性的设备还是不锈钢设备，选择的时候主要考量哪些因素？
A：针对偶联和纯化，目前一次性的设备和不锈钢的设备都有。在偶联过程中个人更倾向于使用不锈钢设备，因为偶联过程中一定会用到一定浓度的有机溶剂，有机溶剂的浓度可能还不低。目前已有一些供应商推出了一次性系统，可能包括和各种有机溶剂的一些相容性数据，但是还要结合自己产品的特点去做比较，工作量比较大。因此更倾向于使用不锈钢设备进行偶联。
Q：小分子（如VCMMAE）灭活的方法？
A：灭活的工艺可能有很多种，需要自己去开发。
Q：ADC的中试放大（公斤级别）偶联和纯化是在化学实验室还是在生物实验室进行？偶联需要隔离器吗？
A：偶联与偶联的纯化部分通常是在生物实验室而不是在化学实验室进行的。偶联步骤中小分子投料这一步一定要在隔离器的环境下进行。真正的ADC偶联时，小分子的占比是非常少的，不一定要到公斤级这么大，完全可以满足ADC的要求。小分子的生产在合成车间进行，偶联和偶联后的纯化因为使用到了抗体，通常更适合在生物实验室进行。
Q：DAR值的检测是用一个方法还是多个方法互相验证？最推荐哪种检测方法？
A：DAR值的确定要结合小分子的特点。检测前期可以通过质谱来定性和分析，后续的日常检测可以利用疏水HPLC来测定DAR值。因为偶联不同的小分子，不同的小分子疏水性不一样，因此出峰时间不同，根据积峰面积的积分比例来计算DAR值。
Q：如何检测抗体和小分子偶联有效性？如何去除裸抗及未偶联小分子？
A：有效性可以用HPLC测定DAR值确定。在做疏水HPLC分析时，未偶联抗体会先出峰，随着偶联小分子的增加，出峰时间会越来越晚，从而可以鉴定出未偶联的比例；因为小分子分子量和抗体及ADC差异比较大，小分子用超滤透析去除。裸抗的去除可以用柱层析，具体的层析柱可以根据产品特点来选择。
Q：偶联反应缓冲体系除了控制pH还有什么作用？体系高和低盐对偶联有什么区别？
A：主要看偶联方式，偶联体系中的pH、温度影响比较大，缓冲体系中有机溶剂的浓度比较重要，会影响小分子及偶联的溶解性；盐的浓度可能会对溶解性有影响，如果盐浓度过高，小分子和ADC的溶解性可能会差一些；对偶联反应的影响不大。
张智涛博士
Q：Payload选择目前更倾向于哪一种或哪一类？美登素是否是优选之一？A：目前我们也在做很多尝试，据了解，Payload主要是根据抗体亲和力和内化效果来选择的；如果抗体亲和力以及内化效果较好，选择中毒性的Payload（SN-38等）会比较合适；如果抗体的亲和力略差，想要高效杀伤效果，选择高毒性的Payload（MMAE等）会比较合适。就目前了解到的情况来说，美登素也是一种不错的选择。另外激酶抑制剂和免疫激活剂、胞内信号通路的抑制剂也是第三类Payload尝试。
Q：DAR值检测方法？如何保证每批药物的DAR值一致？
A：DAR值采用质谱和HPLC检测，目前也有用payload抗体进行检测的，尝试做一些定量分析；DAR值是均值，一般认为只要在一个范围内即可，以此来判断均一性和稳定性。
Q：ADC药物抗体部分早期开发免疫筛选阶段的关键点有哪些？
A：这也是我们比较关注的一个点。在早期免疫阶段首先会关注免疫抗原天然构象，天然构象决定了免疫拿到的抗体是不是能够跟抗原进行有效的识别；其次包括抗原抗体亲和力和特异性选择；还要关注拿到抗体后的半衰期的情况，ADCC效应及与FcR的结合等。这其实跟我们常规抗体药物的开发关注点类似。
Q：ADC的单抗部分在杂交瘤的筛选过程中需要关注细胞活性吗？还是亲和力达到要求就可以了？
A：杂交瘤的早期筛选是亲和力评估为主，确定合适的候选抗体后就需要安排细胞内化评估。
Q：内化的性质在抗体分子确定之后就难以改变了吧？所以是不是需要候选分子多一些，来选出内化较好且亲水性较好的裸抗？
A：常规不会变化，但是如果修饰了paylaod 之后会有变化的可能，这就是为什么裸抗也需要测内化。候选分子的确内化好，亲水好是策略，但是linker和payload的疏水性会对整个药物的稳定性，有影响，也需要综合考虑。
A：以ADC药物为例，ADC药物进入癌细胞后发生降解，降解后重新形成药物小分子。细胞利用细胞泵这样的系统刺激外原物质外排，小分子（payload）外排后会通过小分子通道进入到周边的细胞，对周边细胞产生杀伤作用，进而对周边细胞进行扩散杀伤，这个就是所谓的旁观者效应。主要是在实体瘤中比较关注。
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免疫、抗体筛选
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免疫原性检测
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The purity of Human Her2, Mouse IgG2a Fc Tag(Cat. No. HE2-H5255) was more than 90% and the molecular weight of this protein is around 225-245 kDa verified by SEC-MALS
Immobilized Human TROP-2, His Tag (Cat. No. TR2-H5223) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Mouse Monoclonal Antibody Against Human TROP-2, Mouse IgG1 with a linear range of 0.1-2 ng/mL (QC tested).
Anti-LIV-1 mAb immobilized on CM5 can bind Human LIV-1, Fc Tag (Cat. No. LV1-H5254) with an affinity constant of 1.74 nM as determined in a SPR assay (Biacore T200) (Routinely tested).
Loaded Anti-Human ROR1 MAb (Mouse IgG1) on AMC Biosensor, can bind Human / Cynomolgus / Rhesus macaque ROR1, His Tag (Cat. No. RO1-H522y) with an affinity constant of 10.2 nM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).
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