常见问题解答

1) 按照ACRO提供的随货说明书中推荐的重构信息进行蛋白重构， 如果暂时不使用蛋白，建议先以冻干粉形式储存。

2) 重构后进行分装， 保证每管分装量不低于 对应COA上推荐的最小分装量， 如果分装规格必须低于COA推荐的每管最小分装量，建议添加 0.1% (W/V) BSA或HSA 作为保护剂， 避光保存在-70℃，三个月内使用，要避免反复冻融。因为冻融过程中很多因素都会影响蛋白的稳定性和活性，比如温度变化（上升/下降）速率和均匀度、操作方式因素，最终可能影响实验结果。

3) 建议以重构浓度进行储存，如果使用浓度低于推荐的重构浓度，可在重构浓度的基础上进一步稀释使用；如果使用浓度高于推荐的重构浓度，建议客户先按 COA 进行重构，再进行浓缩到需求浓度使用。

建议保存温度在-80℃是出于长期保存的稳妥考虑。我们的蛋白都是冻干粉，经过严格的稳定性测试，在常温下稳定性很好，而且我们选用的快递都能次日达，遇到特殊物流情况也就 2-3 天时间，短时间内冻干粉蛋白不会出现稳定性问题。 如果对运输温度特别在意，我们提供付费的蓝冰或者干冰运输。但出于冻干粉的可靠稳定性和全球客户多年来的实际经验，建议还是不用加运费的方案。

我们强烈建议不要在4度或室温下储存重构溶解后的液体形态的蛋白。如果在一段时间内需要多次使用蛋白，最好的方法是按照COA分装对应规格推荐的每管最小分装量，在-70℃或以下保存，并根据需要解冻进行使用。另外，需避免重构蛋白反复冻融，一般冻融一次没有什么问题的。

不推荐高于 COA 浓度的溶解，因为可能会影响到蛋白的稳定性或者定量。蛋白重构的浓度和溶剂需要按 COA 操作， 如果确实有特殊的重构需求，请与公司技术部门沟通，或者建议购买小包装进行预实验。

常见的有冻干保护剂海藻糖，稳定剂如 BSA 和 HSA 之类（避免蛋白吸附损失）。蛋白产品以冻干状态提供，冻干前的原液含有 10％海藻糖作为保护剂，重构后的海藻糖浓度因产品和批次而异，所有相关信息都将在特定批次的 COA 中提供给您。

海藻糖对于保持蛋白稳定性和活性至关重要，我们不推荐去掉。如果需要无海藻糖的蛋白，建议在试验前做一下缓冲液交换来去除海藻糖，市面上有许多可用的试剂盒，例如 Vivaspin 超滤系统。但请注意，换液过程中蛋白活性有可能会受到影响。

产品的效期是从您收到货之日起并结合对应COA上的推荐储存时间进行计算，在此期间，您使用中遇到任何问题，都可以随时联系我们。

对应批次COA在Formulation部分包含冻干前原液的体积信息，可以直接根据对应规格质量和原液体积计算冻干前原液浓度： 原液浓度= Size(ug/mg)/(µl)

是的，所有的 Fc 融合蛋白在溶液中理论上会经历 Fc 介导的二聚化，其聚体形式可能会增强蛋白活性和稳定性。但某些Fc 融合蛋白有可能由于本身性质原因进一步聚集并形成高聚体。某些蛋白的非还原 SDS-PAGE 或 SEC数据能够反映获得的蛋白聚集形式（二聚体/三聚体/高聚体）。

原液的内毒素水平可以代表冻干品的内毒素水平，根据经验，冻干品的内毒素检测值会比原液高20-30%（属于正常差异范围，因为冻干时需考虑适量补偿因吸附等损失及纯度因素），我们冻干过程是严格无菌无热源操作，一般不会引入热源，所以原液的内毒素水平基本上可以代表冻干品的内毒素水平。

ACRO 的绝大部分产品都未添加载体蛋白，只有少数几个产品添加了 BSA，建议以产品网站 buffer 信息为准。

大多数来自 ACRO 的生物素化蛋白是基于 avi-tag 标记的单点酶标的方法进行生物素化的。 理论上，添加任何分子/标签都可能影响蛋白质的天然状态，从而影响其生物活性。然而，生物素分子和 Avi 标记都很小，并且插入到目标蛋白的结构域之外。因此，一般情况下蛋白活性不太可能受到标记的影响， ACRO 一般会对所有标记蛋白进行生物活性验证以确保蛋白活性良好，验证方法是通过 ELISA、 FACS 或细胞法检测生物素蛋白与抗体或配体的结合。

我们有丰富的生物素标记经验，对于生物素标记的方法和条件都有足够的积累，形成了标准化生产流程。 另外， 我们也会严格控制出厂产品的 HABA 值以及活性方法验证的批间差。相对而言，在这个严格的标准下，生物素标记产品的产量会受影响，这也是它相对未标记产品更贵的一个原因。

酶标和化标两种生物素化的产品都会通过脱盐去除掉游离的生物素，即使有残留，也只是有很少的残留。

ACRO 使用的海藻糖是药用注射级的，而且在实验的时候还会进行稀释，这种情况下海藻糖对细胞实验理论上影响不大，如果是严谨起见，可以实验设置buffer对照组。

如果类似PD1和PDL1这样的免疫检查点，受体配体的亲和力比较弱的蛋白，建议选择蛋白本身带有Fc或者mFc标签的蛋白，检测受体和配体的结合，这样得到的信号会比较好，实验也会更稳定，具体实验也欢迎参考ACRO网页实验数据或者和ACRO技术支持进一步沟通。

HEK293细胞，又叫人胚胎肾细胞293. HEK293表达的蛋白，它的折叠修饰更加接近人体内真实的蛋白的形式。HEK293表达的蛋白，它的折叠修饰更加接近人体内真实的蛋白的形式，而我们开发的大部分都是人类相关疾病的靶点或者因子，所以选择了HEK293表达系统。