根据维基百科的解释,DNA气溶胶是“A liquid droplet carrying any free submicroscopic practice is known as aerosol”,这些微滴往往在实验过程中产生,并一直留在实验室操作环境的周围或附近的空气中。所以,DNA气溶胶是携带未知DNA片段的液滴,特别是这种液滴非常小,以至于它们可以漂浮在大气中。
由于DNA气溶胶中存在外源性DNA,这些外源性DNA可能会引起非特异性扩增,最终导致假阳性结果的出现,影响PCR实验结果的判读。
DNA是一种微小的生物分子,在显微镜下都看不到。与此同时,DNA分子比较脆弱,容易片段化。这两种特性使其更容易成为气溶胶。DNA气溶胶产生的原因:
1. 将使用过的枪头,EP管和手套留在生物安全柜中;
2. 在同一区域频繁进行DNA相关的实验;
3. 不规范的移液器操作。
比如,实验人员在稀释高浓度DNA样本的时候极容易会产生DNA气溶胶,生物安全柜的气流使其在周围大气中扩散,并且混匀过程中无缘无故地不断按压移液器会加重气溶胶的产生。
为了减少核酸提取,PCR和任何其他基因实验过程中,极易出现的DNA气溶胶污染,ACROBiosystems的分子研发平台遵循基因实验室设置和核酸工作的国际标准,整理出一套完善的工作SOP,以期帮助我们的实验人员减少在工作流程中存在的DNA气溶胶问题。
一、实验空间建议:
为控制在提取、稀释、以及qPCR过程中发生核酸或产物气溶胶污染对实验结果造成影响,建议PCR实验室分间设置 【试剂准备间(无核酸)、样本提取间、扩增间;或至少分阴性间(试剂准备)、阳性间(样本提取+扩增)】,以及适当的气流、压差控制。
二、实验室核酸污染整体清洁:
使用核酸清除剂对各个实验操作区域进行清洁,喷洒范围:生物安全柜工作区(包括安全柜操作台面、前壁、左右侧壁;若操作台面可掀起,请掀起操作台面对下方底面、背面同时进行彻底消杀)、桌面、移液器、离心管架、磁力架、冰箱门把手、实验室空间等,喷完核酸清除剂后反应10~15min;最后需用无尘纸和70%酒精对核酸清除剂喷洒过的区域进行清洁;
用70%酒精对移液器进行整体喷淋,特别是移液器与枪头连接处位置,对该位置进行喷淋冲洗,最后用无尘纸吸干酒精并风干防残留;
用70%酒精喷淋,再用纯化水浸泡至少20min,冲洗干净,晾干;
用纯化水或自来水清洗拖布,对实验室地面进行清洁,清洁后立即清洗拖布;也可用10%次氯酸钠消毒水喷洒地面,然后再用自来水清洗拖布清洁次氯酸钠;
清洁完成后对实验室进行整体紫外照射消毒,约15~30min,每周进行1次;紫外照射完成后打开风机排风10~30min;
实验垃圾须及时处理,扎紧垃圾袋放到特定垃圾处理间统一处理(非HCD检测实验室)。
建议对检测流程的每个实验区和生物安全柜中至少每月进行1次环境核酸污染监测(根据各自实验室使用和检测频次高的目的核酸进行qPCR),即用八联排PCR管直接加入10µL ddH2O开盖放置1-2小时,然后加入对应PCRmix,进行qPCR检测。
三、实验日常清洁:
在生物安全柜完成核酸相关实验操作后,须在当天对生物安全柜进行核酸清除剂清洁:使用核酸清除剂对生物安全柜的台面、前壁、左右侧壁喷淋,反应10~15min后用70%酒精擦拭干净,生物安全柜紫外照射消毒15~30min;
对当天使用过的移液器进行核酸清除剂清洁,反应10~15min后,70%酒精擦拭干净;
对当天使用过的离心管架、PCR管架、磁力架等用70%酒精喷洒,再用纯化水浸泡20min左右,纯化水冲洗干净,晾干;
对当天实验室内桌面进行核酸清除剂清洁,反应10~15min后,用70%酒精擦拭清洁干净;
至少每周一次。
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