GMP专题（二）：CGT生产关键物料的无菌保障策略

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基于细胞治疗产品全过程无菌生产的特点，生产中使用的原材料必须是无菌的，无菌保证失败意味着细胞治疗产品生产失败，最终导致无法及时提供符合质量要求的药品给患者。

所以无菌性是细胞治疗用原材料的关键质量属性，原材料生产过程的无菌控制策略显得尤为重要。尤其是细胞因子、抗体、酶类原材料的生产工艺大多为非终端灭菌工艺，必须要通过风险评估识别出可能引起微生物污染的根源，包括但不仅限于对厂房、设备设施、工艺设计、物料处理、人员规范、生产操作、环境监测等方面进行风险识别和评估，并针对性地制定生产管理和质量控制各方面的控制措施。

基于此，各国GMP法规和指南都对无菌控制策略提出了相关要求，行业遵循的国内外GMP法规与指南通常有：

⑴ 欧盟药品生产质量管理规范 EU Vol.4 GMP 附录一 无菌药品生产；

⑵ 美国FDA现行版GMP法规 （21 CFR Part 210, 211, 600）；

⑶ 中国药品生产质量管理规范(2010 年修订) 及其附录一 无菌药品；

⑶ FDA行业指南：无菌加工生产的无菌药品；

⑷ PIC/S GMP 附录1 无菌药品生产。

其中，2023年8月25日推出的新版欧盟GMP法规附录一中的无菌产品生产对无菌产品及其控制要求最为严格。法规明确无菌产品的范围涵盖原料药、辅料、内包装材料和成品制剂，以及多种包装规格、生产工艺和技术。同时，该法规提供了采用质量风险管理（QRM）原则对所有无菌产品生产所用设施、设备、系统和程序的设计和控制应实施的总体指导，以确保最终产品中无微生物、微粒和内毒素/热原污染。该指导原则明确需从厂房设施、设备、工艺、物料、检测及环境监测等方面进行整体评估和污染控制。

ACROBiosystems百普赛斯GMP级别产品参考上述法规指南要求，对厂房、设施、设备、物料、工艺、人员等方面的无菌保障策略进行了整体的设计和考量，并通过质量保证体系、运用PDCA工具实现持续改进和提升。

生产厂房、公用设施及设备符合GMP法规要求，产品生产前通过完整的差距分析风险评估和共线生产风险评估，从使用、清洁消毒和维护等方面制定书面程序并严格执行，确保这些基础设施的管理不会对产品的无菌控制造成负面影响。

02

人员管理

参与生产和质量管理活动的人员有相应足够的教育背景、培训和经验，可确保正常生产并确保污染、交叉污染得到有效控制。

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物料管理

生产用原辅料、包材尽量选取在CDE备案的药用级原辅料和包材。通过资质收集、现场审计等方式进行严格的物料供应商管理，结合风险评估制定合适的质量控制策略，进行微生物控制。

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生产工艺及质量控制

● 生产过程无菌控制要点：

● 上游细胞培养：

◆ 细胞培养生产过程严格规范人员更衣和行为要求，减少操作过程带来的污染风险。

◆ 细胞复苏、摇瓶扩增阶段以C级洁净区作为背景环境，敞口操作在生物安全柜A级层流保护下进行，并同步进行动态环境监测，反应器扩增和流加培养阶段均采用一次性无菌密闭系统，利用无菌焊接技术来实现接种、补料等过程，有效避免微生物污染。

◆ 细胞培养阶段使用的物料会进行内毒素控制，结果合格经质量放行后才能被使用；培养基及溶液配制使用的工艺用水为符合药典要求的注射水，溶液配制后经0.1μm / 0.22μm滤器除菌过滤，过滤器使用后进行完整性检测，同时对溶液进行无菌检测，两者结果合格后溶液可用于细胞培养生产；二氧化碳、氧气、压缩空气等工艺气体的级别均为高纯级别或食品级别，连接反应器的工艺气体经末端0.22μm滤器有效除菌；反应袋、储液袋等一次性耗材经辐照灭菌确保无菌性，确保与料液直接接触的物料不会引入微生物污染。

◆ 澄清过滤用深层过滤膜包为一次性使用，使用前经注射水进行冲洗，对膜包本身含有的杂质进行去除，澄清过滤后料液在末端使用0.22μm滤器，有效降低微生物负载；同时澄清收获液进入下游纯化工序前，会进行内毒素的检测，以确保进入下游纯化步骤的中间品满足工艺要求。

● 下游纯化：

◆ 纯化过程使用的分离柱、层析介质等均为项目专用，且不用于不同的生产阶段，避免交叉污染风险。每批生产结束后，层析系统会进行清洗并依据风险评估进行清洁确认，层析介质会根据书面程序进行清洗和保存，并在下一批生产前再次清洗后投入使用，可有效减少微生物的影响。

◆ 纯化阶段与产品直接接触的物料、耗材的微生物管控方式与细胞培养阶段一致，确保不引入微生物污染。针对重复使用的工器具，通过湿热灭菌的方式确保无菌性。

◆ 经分离、层析的料液经纳滤、超滤工艺步骤，再经0.2μm除菌过滤后进行分装，分装在A级层流保护下进行，降低环境对产品的微生物污染。原液按照质量标准开展各项检测，包括微生物限度和内毒素，结果合格并经质量部门放行后进行终产品灌装。

● 制剂成品：

◆ 成品灌装为非终端灭菌的无菌生产工艺，确保在严格的B+A生产环境进行：原液经除菌过滤得到半成品后，使用全自动设备以及一次性无菌灌装系统，在A级无菌环境下进行无菌部件组装、灌装、加塞、自动进出料和冻干等操作（PMS持续环境监测系统），冻干结束后在C+A环境下完成轧盖密封，获得的待包装产品经人工灯检、贴标等操作，并且检验合格后方可成品入库和放行。

◆ 严格的无菌工艺验证：无菌工艺控制的定期确认包括使用无菌营养培养基和/或产品替代品的APS（培养基模拟罐装）。APS会评估从工艺所用物料的灭菌和清洁后到容器密封之间进行的所有无菌操作，并对培养基进行促生长实验，确保培养结果的可靠性，此外，微生物侵入试验是保障产品包装系统密封性的手段之一，进而保障产品在储存过程中的无菌性。

◆ 成品质量控制：成品的无菌检验是确保无菌性的一系列关键控制措施中的最后一步。无菌检验在无菌隔离器内进行，用于无菌检验的取样包括在本批次灌装开始和结束时的产品，充分具有代表性；无菌分析方法确认严格按照中美药典要求进行，采用ATCC和CMCC认证的菌株，并按照药典对生物制品要求的培养条件进行培养，确保结果可靠性。

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