【前沿进展】抗肿瘤黑科技——TIL细胞疗法

TIL细胞疗法是指从患者自身的肿瘤组织中采集并分离出具有特异性识别肿瘤细胞抗原能力的T淋巴细胞，在体外通过白介素-2(IL-2)快速活化和扩增后再回输到患者体内, 最终实现对肿瘤的裂解和杀伤效果的一种细胞疗法。TILs主要包括T细胞、巨噬细胞、NK细胞和树突细胞等，在TILs亚群中，起到正向调节免疫应答的免疫细胞包括CD4+Th1细胞、CD8+细胞毒性T细胞、NK细胞、巨噬细胞M1型和树突细胞DC1型等，可发挥很好的抗肿瘤细胞免疫应答。另外，因TILs来自肿瘤组织，具有很强的肿瘤归巢特性，对肿瘤细胞具有良好的靶向作用，与其它免疫疗法（例如CAR-T、PD-1/PD-L1抗体）相比，TIL具有多靶点、肿瘤趋向和浸润能力强、副作用小等优势，是实体瘤治疗的理想选择，前景广阔。

最常见的TILs生产方法是从切除的肿瘤组织中分离 TIL，并使用快速扩增法(REP) 在体外进行扩增：将肿瘤组织切除切成小块，然后添加胶原酶、脱氧核糖核酸酶以及透明质酸酶等将肿瘤碎片进一步消化，通过密度梯度离心或特定的细胞分选方法（MACS/FACS)）分离出TILs，虽然这种方法可快速从肿瘤中分离 TILs，但细胞可能会受到损坏，一些研究建议将肿瘤块分割成1mm³ 大小块后放入含有高剂量的IL-2培养基中培养两周，让 TILs逐渐从组织块中流到培养基中而获取，但需要2-3天补充一次IL-2，所以该方法需使用大量的IL-2。有学者为减少体外培养周期并保持TIL 的功效， 他们在快速扩增法操作时，将高剂量的IL-2、抗CD3抗体和PBMC饲养层细胞添加到TIL培养体系中；另外，尽管 TIL 的扩增主要通过使用高剂量的IL-2，但也有其他体外扩增和刺激试剂，如使用细胞因子（如 IL-15 和 IL-21)、共刺激分子、免疫检查点抑制剂等来刺激扩增。

已有多种方法检测和去除整个TIL 生产过程中残留的肿瘤细胞：快速扩增法的培养条件只支持淋巴细胞生长，所以残留的肿瘤细胞在培养后会死亡而去除；Ficoll-Hypaque密度梯度离心时可通过尼龙单丝网过滤消除残留的肿瘤细胞；也有研究显示，可使用经IL-2刺激的单核细胞来去除或在无血清环境中培养。此外，可采用实时定量聚合酶链反应、免疫组织化学、流式细胞术以及原位荧光杂交等，对如S100、gp-100、MART-1等肿瘤相关抗原的检测来确定是否存在残留的肿瘤细胞。

患者通过化疗和放疗后，然后通过静脉给药途径，将质控合格的约10-1500 亿个的TILs随着高剂量IL-2回输到患者体内。

TIL疗法的生产过程 Frontiers in immunology, 13, 1018962.

近几年，关于TIL疗法的研究数量持续增长，目前，国内外已有多家企业布局TIL疗法，如Iovance、沙砾生物、卡替医疗、君赛生物、西比曼生物等。

● Iovance Biotherapeutic

IOV-4001是一种基因编辑、PD-1失活的TIL疗法，利用TALEN®技术敲除PD-1基因，以减少PD-L1依赖性TIL失活，通过PD-1的内在沉默来提高传统TIL治疗的体内存活率和功能，增强TIL机制的抗肿瘤活性，直接靶向并杀死肿瘤细胞。

参考文献