【病理干货】HE染色步骤及常见问题解析

- 二甲苯

- 梯度乙醇

- 苏木素染液

- 伊红染液

- 分化液

- 返蓝液

- 中性树胶固封剂

- 二甲苯3缸，浸染5min；

- 无水乙醇2缸，浸染2min；

- 75%，85%，95%梯度乙醇各1缸，浸染1min；

- 自来水浸1min；

- 苏木素浸染5-8min；

- 自来水冲洗；

- 分化：根据分化液不同，数秒或数分钟不等；

- 自来水冲洗；

- 反蓝：根据返蓝液不同，数秒或数分钟不等；

- 自来水冲洗；

- 伊红浸染1-5min；

- 自来水冲洗；

- 75%、85%、95%梯度乙醇各1缸，浸染10-20s；

- 无水乙醇2缸，浸染1-2min；

- 二甲苯2缸，浸染2min；

- 中性树胶固封。

- 组织完整；

- 厚薄均匀；

- 染色清晰，对比度高；

- 无明显褶皱、破损、刀痕、裂隙等；

- 着色无污染；

- 固封适中，无气泡、空腔，透明度好。

● 组织本身如凝血块、血栓、分泌物等，干涸或过硬的组织及组织破碎等，染色时易脱落。可尝试使用防脱片；

● 组织脱水、透明不佳，石蜡未完全浸透，组织较软，切片脱蜡时收缩，染色时又膨胀，进而易脱片。可尝试重新脱水；

● 组织脱水浸蜡时间过长或温度过高，组织过硬、过脆，切片时不易完整，且易脱片。可尝试在切面敷乙醇或乙醇甘油后切片。

● 组织固定不当，固定好的部位着色清晰，未固定好的部分着色模糊；

● 组织脱水不佳，部分组织内含水，导致浸蜡不充分，造成部分染色出现灰染可尝试重新脱水；

● 切片薄厚不均或有横纹；

● 切片脱蜡不充分，含蜡部分着色浅或不着色；

● 切片上有气泡，导致与染液接触不充分。

● 展片台，水面有杂质或碎屑；

● 切片机刀头有组织碎屑或杂质，易粘黏到蜡带上；

● 染色液中有污染、碎屑、色素颗粒、沉渣等。