【病理干货】类器官样本处理流程

• 取材：遵循相关法律法规及伦理规范，在获得患者知情同意后，通过活检或手术切除等方式获取组织样本。样本需优先选择生长旺盛、无坏死的区域；

• 保存：样本采集后立即置于预冷的组织保存液中，确保温度控制在4-8℃，并在48小时内送达实验室。

• 清洗：使用无菌生理盐水对样本进行多次清洗，直至无明显血渍和污渍；

• 剪碎：在无菌环境下，使用眼科剪将组织剪碎至1-3mm³的小块，便于后续消化。

• 消化：向组织块中加入适量的消化液（如TrypLE或胶原酶），在适宜温度（如37℃）下消化一定时间（如15-30分钟），期间需轻柔吹打以促进消化；

• 终止消化：当镜下观察到大量细胞团时，加入缓冲液终止消化，并通过过滤去除未消化的组织碎片。

• 准备基质胶：确保基质胶已充分融化并预冷；

• 混合：将消化好的细胞团与基质胶按一定比例混合均匀，注意避免产生气泡；

• 点板：将基质胶细胞团混合物均匀点入培养板中，每孔加入适量的类器官培养基。

• 培养：将培养板放入37℃、5% CO2的培养箱中培养，直至类器官形成；

• 观察：定期观察类器官的生长情况，记录形态、大小等变化。

1. 样本质量：确保样本新鲜、无污染，且含有足够的活性细胞；

2. 消化效果：消化过程中需密切关注消化情况，避免过度消化导致细胞损伤；

3. 基质胶接种：基质胶的均匀混合及点板操作对类器官的形成至关重要。

1. 细胞活力：消化后获得的细胞存活率应大于80%；

2. 类器官形成率：在一定时间内，类器官的形成率应达到预设标准；

3. 形态与功能：类器官应具有与原始组织相似的形态和功能特征。

1. 污染：一旦发现污染，应立即丢弃受污染的样本，并追溯污染来源，采取相应措施防止再次发生；

2. 消化不足：若消化后细胞团较少，可适当延长消化时间或增加消化液浓度；

3. 基质胶问题：如基质胶凝固不良或形成不均，应检查基质胶的储存条件及混合比例，并重新操作。

• 样本运输与保存：样本在运输过程中可能会因温度波动或机械损伤而导致细胞活力下降。预防措施包括使用专业的样本运输箱，内置温度监控设备，确保全程温度稳定，并减少震动和挤压。此外，样本到达实验室后应立即进行处理，避免长时间储存。

• 无菌操作：整个处理流程中必须严格遵守无菌操作规范，以防止微生物污染。任何环节中的疏忽都可能导致培养失败。预防措施包括在无菌室内进行操作，使用无菌器材，并在操作前对双手和器材进行充分消毒。

• 培养条件控制：类器官的培养条件对其生长至关重要，包括温度、湿度、CO2浓度和光照等。任何条件的微小变化都可能影响类器官的形成和发育。预防措施是定期校准和维护培养箱，确保其运行稳定，并严格按照预设条件进行培养。

• 试剂与耗材的质量：使用高质量、经过验证的试剂和耗材是确保实验成功的基础。低质量或过期的试剂可能导致实验结果不准确或失败。预防措施是定期检查试剂和耗材的有效期，并在使用前进行验证测试。

• 人员培训与经验：类器官培养技术相对复杂，需要操作人员具备一定的专业知识和技能。缺乏经验或培训不足可能导致操作失误和实验失败。预防措施是定期对操作人员进行培训和考核，确保其熟练掌握实验技术和操作流程。

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