基因治疗是解决遗传疾病的一种突破性方法，它采用一系列策略，利用非病毒或病毒载体来修饰靶细胞内的基因表达。截至目前，共有43种体内/体外基因疗法获得FDA批准。在这些批准的基因疗法中，17种是非病毒型基因疗法，26种是病毒型基因疗法。各种病毒载体已被研究用于体内基因治疗，包括腺相关病毒（AAV）、腺病毒（Ad）、逆转录病毒、慢病毒和单纯疱疹病毒（HSV）等，其中AAV载体已成为临床试验和FDA批准应用中的首选。作为递送基因疗法的有力工具，AAV具有许多吸引人的特征，如安全性高、表达时间长、适应症范围广以及低免疫原性。以AAV为载体的基因疗法已在多种适应症上取得了进展，包括眼科疾病、血友病、肌肉疾病、中枢神经系统疾病等。目前，全球已有多款上市的AAV基因治疗药物，成药性得已验证。
Approved gene therapy products and delivery platforms
实际上，制造出一种安全有效的AAV药物并不容易，其生产过程具有复杂性，包括构建载体、细胞培养，提取和纯化病毒颗粒等步骤。在此过程中，须对多种关键质量属性进行检测，其中关键放行指标之一就是AAV滴度测定，足够的病毒滴度是AAV基因治疗有效地发挥作用的基础，准确定量AAV载体病毒滴度对临床前和临床的剂量标准至关重要。此外，在AAV载体培养过程中，使用传统上游工艺产生的病毒滴度，通常无法产生足够的病毒滴度，往往低于治疗患者所需，为了达到有效剂量，批次需要浓缩100到10000倍。因此，如何准确有效的进行滴度测定是AAV基因治疗药物早期研发、生产和质控的重要组成部分，也是开展临床前研究和临床研究的前提条件，稳定可靠的滴度才能保证准确给药剂量，更好地指导临床用药。
研究表明人体中预先存在多种血清型AAV抗体，这些预存抗体一方面会在一定程度上降低基因治疗的效果，极大限制了AAV基因治疗的推广；另一方面，AAV抗体的效价在个体内会随着时间的推移而变化，治疗中产生的抗体也可能会阻碍患者使用相同的基因治疗方案进行二次治疗，这将对基因治疗药物的时效性产生一定的限制。因此在进行系统性基因治疗给药之前，准确、可靠地检测AAV抗体是确保疗效和安全性的重要考虑因素，需要针对实验动物或入组治疗的人群先检测预存抗体含量。虽然传统上通常利用基于细胞的检测方法来检测样品中存在的中和抗体水平，但基于ELISA的总抗体检测方法由于其操作更便捷、用时更短等优势，已成为样本前期快速筛选的方便有力工具。尤其是在处理大量样本时。一项在恒河猴和人血清中对AAV1、AAV8和AAV9血清型进行的比较研究显示，ELISA与基于细胞的分析之间具有高度一致性（Pearson r > 0.8），验证了ELISA作为临床前和临床应用有效筛查方法的可行性。
Correlation between ELISA and neutralization assays for rhesus macaque samples pre- and post-AAV inoculation
综上所述，AAV滴度ELISA试剂盒可确保病毒衣壳的精确量化，从而促进准确给药和载体生产中的严格质量控制，而抗AAV抗体ELISA试剂盒则可高效筛查可能影响治疗疗效的预先存在的中和抗体，这些检测共同增强了基因治疗开发的稳健性。
ACROBiosystems百普赛斯经全面方法学验证，推出的AAV滴度ELISA检测试剂盒具有高特异性、高灵敏度、高准确度等特性，帮助您实现快速精确的AAV滴度检测！同时，我们开发出的AAV预存抗体ELISA检测试剂盒，可用于AAV基因治疗预存抗体临床检测，支持药物样本前期快速筛选。
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AAV5 Titration ELISA Kit/(fast)
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AAV2 Titration ELISA Kit/(fast)
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AAV8 Titration ELISA Kit/(fast)
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AAV9 Titration ELISA Kit/(fast)
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AAV3 Titration ELISA Kit/(fast)
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Anti-AAV5 Antibody ELISA Kit
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Anti-AAV8 Antibody ELISA Kit
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Anti-AAV9 Antibody ELISA Kit
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Anti-AAV2 Antibody ELISA Kit
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The specific binding of AAV-A005H to AAV1/2/3/8/9/dj serotypes was detected. The results showed that AAV-A005 only binds specifically to AAV5.
The specific binding of AAV-A005H to denatured AAV5 was detected. The results showed that AAV-A005 only binds specifically to Native AAV5.
AAV-A005H can detect the AAV5 Capsids from different manufacturers with similar sensitivity.
Detection of anti-AAV2 antibodies by sandwich-ELISA Assay.Immobilized AAV2 Capsid Protein can bind Anti-AAV2 Antibody in 1:100 human serum, and then add Biotin-AAV2 Capsid Protein. Detection was performed using Streptavidin-HRP with sensitivity of 125 ng/mL.
The specific binding of PAV-A002 to Anti-AAV1/3/5/6/8/9 antibody was detected. The results showed that PAV-A002 only binds specifically to Anti-AAV2 antibody.
参考文献
1.Wang JH, Gessler DJ, Zhan W, Gallagher TL, Gao G. Adeno-associated virus as a delivery vector for gene therapy of human diseases. Signal Transduct Target Ther. 2024;9(1):78. Published 2024 Apr 3. doi:10.1038/s41392-024-01780-w
2.Gardner MR, Mendes DE, Muniz CP, et al. High concordance of ELISA and neutralization assays allows for the detection of antibodies to individual AAV serotypes. Mol Ther Methods Clin Dev. 2022;24:199-206. Published 2022 Jan 7. doi:10.1016/j.omtm.2022.01.003
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