【内毒素专题一】β-葡聚糖偶联抗体药与重组C因子内毒素检测的重要性

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内毒素可引发生物体炎症反应,严重时导致全身性炎症反应综合征、伤害血管内皮细胞、引发低血压休克、促使血液高凝而形成血栓并损害器官功能，所以在生物医学研究与药物工艺中内毒素检测极为重要。目前常用基于LAL鲎试剂的内毒素检测方法，如凝胶法、动态显色法等，它们依赖于鲎血液中的一种特殊细胞对细菌内毒素产生的凝集反应来检测样品中的内毒素。然而，这种方法的特异性一直是一个挑战，因为鲎试剂除了对内毒素有反应外，还可能对其他物质产生凝集反应，尤其是在这些检测过程中，β-葡聚糖是会影响内毒素检测结果的主要物质。

实际上，相关研究表明静脉注射β-葡聚糖可作抗肿瘤单抗佐剂，通过补体受体 3(CR3)增强白细胞对包被 iC3b 的肿瘤细胞杀伤作用，与抗肿瘤单抗联合使用在多种肿瘤模型中有显著肿瘤消退效果，因其可作用于多种免疫受体并激活一组免疫细胞。基于此提出抗体-β-葡聚糖偶联物(AGC)策略，通过将抗 PD - L1抗体与β-葡聚糖偶联构建AGC，有助于将β-葡聚糖输送至肿瘤微环境,其桥接作用能促进肿瘤细胞与树突状细胞相互作用，增强免疫治疗益处，在 MC38 肿瘤小鼠模型中，AGC 肿瘤抑制率达 86.7%。

抗 PD - L1抗体与β-葡聚糖偶联构建AGC

然而鲎试剂的凝集系统中存在着G因子反应旁路，可以被β-葡聚糖所激活产生细菌内毒素检查的假阳性，因此，在抗体药物开发过程中, LAL内毒素检测方式受β-葡聚糖旁路因子影响而面临挑战。尽管葡聚糖无药典或监管文件限制，但这些内毒素的检测结果可能会导致药物放行检测与申请审查无法通过。此外，β-葡聚糖广泛存在于真菌、酵母、藻类以及某些人造纤维中，所以实际应用中也很难完全避免。

β-葡聚糖导致内毒素检测假阳性示意图

然而AGC策略在癌症治疗有潜力，因此，选择合适内毒素检测方法选择是抗体药物开发的关键环节。研究显示，使用重组C因子(rFC)检测内毒素表现出卓越优势，研究人员检测β-葡聚糖中的内毒素残留时, 在β-葡聚糖浓度为10μg/mL和1μg/mL下均未检测到非特异性信号，说明 rFC 不会与 β-葡聚糖反应，特异性良好；而 β- 葡聚糖动态显色法检测内毒素时会出现非特异性信号。若采用易受 β- 葡聚糖干扰的检测方法，会使内毒素检测结果不准确,影响抗体药物质量与安全性评估。因此，重组C因子检测不受β-葡聚糖干扰，可精准检测抗体中的内毒素含量，为药物研发人员提供可靠数据支持，确保抗体药物符合质量标准，提高药物开发成功率推动抗体药物向更安全、有效方向发展,为攻克疾病提供有力药物保障。

重组C因子法内毒素检测具高专一性，不受葡聚糖影响

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参考文献

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2.β-Glucan Functions as an Adjuvant for Monoclonal Antibody Immunotherapy by Recruiting Tumoricidal Granulocytes as Killer Cells.　Feng Hong, Richard D. Hansen, Jun Yan, and Gordon D. Ross.　CANCER RESEARCH 63, 9023–9031, 2003 Dec. 

3.β-Glucan–conjugated anti–PD-L1 antibody enhances antitumor efficacy in preclinical mouse models. Qian Wang, Hao Jiang, Hongli Zhang, and Guangli Yu.　Carbohydrate Polymers 324 (2024) 121564.

4.https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/37303996