【技术干货】CKP抗体药体外功能分析方法-原代细胞水平

免疫检查点药物由于出色的临床疗效，成为肿瘤免疫治疗备受关注的焦点，针对免疫检查点的抗体药物更是免疫治疗的热点领域，成为医药巨头竞争的前沿阵地。抗体药的研发关键在于药效，但同时体外活性的研究至关重要，可为体内药效提供早期的数据支持，尤其使用原代细胞基础上的体外相关研究，在一定水平上更能真实反应抗体药物的作用机制（MOA），目前用于免疫检查点抗体药物的原代细胞水平体外活性研究，主要集中于T细胞激活增殖、混合淋巴反应（MLR）、Treg耗竭验证，ADCC功能等评价方法，本文结合几种CKP相关抗体药物，以实际案例剖析原代细胞基础上的体外功能验证。

T细胞激活和增殖活性

CKP激动剂药物

IBI101（抗OX40抗体）可对T细胞进行有效的激活和扩增

Cancer Immunol Immunother. 2020;69(6):939-950.

瑞典Alligator Bioscience公司的双靶点ATOR-1015药物（CTLA-4xOX40），使用CTLA-4或FcγRI交联，与CD3抗体固定后（或者后期加CD3抗体磁珠），加入CD4+T细胞和药物，通过ELISA测定IFN-γ/IL-2的分泌。结果显示，ATOR-1015双靶点抗体可通过OX40来诱导T细胞活化，且相比于两个靶点的单抗混合物，具有更强T细胞激活能力。

ATOR-1015 的T细胞激活验证

CKP抑制剂药物

混合淋巴反应（Mixed Lymphocyte Reaction，MLR），是一种原代的DC细胞和T细胞共培养的系统，该系统可被用来评估DC介导的T细胞活化。由于免疫检查点抑制剂药物是通过阻断通路起作用，DC细胞表面大量表达PD-L1，可与T细胞表面的PD-1结合起抑制作用，若药物能有效阻断两者的反应通路，就能大量刺激T细胞增殖，从而验证药物功能活性。通常，将PBMC细胞中DC和T细胞分离纯化后（DC细胞培养时需添加IL-4、GM-CSF等细胞因子），与抗PD-1抗体药物共培养后，ELISA测定IFN-γ等因子的分泌，3H-TdR掺入法测定T细胞的增殖。

MLR评估DC介导的T细胞活化

Nivolumab可有效阻断PD-L1（DC）-PD-1（CD4+T），促进T细胞的增殖与活性

Cancer immunology research, 2(9), 846–856.

ADCC功能研究

肿瘤免疫微环境中的免疫细胞可以通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）来杀伤肿瘤细胞，除肿瘤细胞外，Treg细胞也同样具有免疫抑制性，因此，抗体药对Treg细胞的ADCC杀伤功能研究也至关重要。同样，以ATOR-1015双抗药物（CTLA-4xOX40）为例，前期，研究人员先使用可表达FcγRIIIa的细胞系验证ATOR-1015对Treg细胞的耗竭功能，他们将外周血中的Treg细胞经CD3/CD28beads激活后，使得Treg细胞过表达更多的CTLA4和OX40用于后续实验，激活的Treg与表达FcγRIIIa细胞共培养，并添加ATOR-1015药物，结果显示，与单靶点药物相比，加入ATOR-1015后能检测到FcγRIIIa表达量的显著提升表明可对Treg细胞有更好的耗竭作用；紧接着，激活的Treg细胞（CD3/CD28 beads激活）作为靶细胞与NK细胞共培养，来测定ATOR-1015的ADCC功能，结果表明，ATOR-1015双抗药物与对应两个单靶点混合抗体具有相同的ADCC杀伤功能。

ATOR-1015对Treg细胞有更强的耗竭，并显示出有效的ADCC功能

相关推荐产品：

★ 抗CD3抗体、抗CD28抗体

★ CD3/CD28抗体偶联磁珠

★ IL-2/IFN-γ等细胞因子检测试剂盒

总结

免疫检查点药物的体外功能分析是验证抗体活性、探索抗体作用机制（MOA），提供药物IND申报依据的重要手段，而基于原代细胞基础上的相关研究方法多种多样，一定层面上可反应药物较为真实的活性功能。为支持CKP抗体药物原代细胞基础上的体外活性研究，ACROBiosystems开发了一系列相关产品，包括免疫检查点蛋白、抗CD3抗体、抗CD28抗体、CD3/CD28抗体偶联磁珠、各种细胞因子以及细胞因子检测试剂盒等，加速CKP抗体药物的研发进程。

产品列表

更多产品信息