【ClinMax™】细胞因子检测在体外药效评价中的应用

双特异性抗体中较为成熟的技术平台有双特异性T细胞接合剂（Bispecific T Cell Engager，BiTE），能够同时特异性地与T细胞表面CD3和肿瘤细胞表面特异性抗原结合，通过募集和激活肿瘤附近的T细胞，而不需要共刺激因子或主要组织相容性复合体（MHC）的识别，对肿瘤细胞进行持续地杀伤。在BiTEs的效力测定中，细胞因子检测是评估其免疫激活作用的重要手段。

越来越多的研究发现，ADC可以诱导免疫原性细胞死亡（immunogenic cell death, ICD），从而促进抗肿瘤免疫反应。在ADC诱导的免疫原性细胞死亡机制研究中，通过检测DAMPs，如HMGB1、ATP和钙调神经磷酸酶B亚基（Calreticulin），以及细胞因子IFN-γ，CXCL10、IL-1β的释放，能有效评估免疫系统的激活程度，综合分析DAMPs和细胞因子从而确定ADC诱导的ICD效应。

Tubulysin引起的所有三种促炎细胞因子均呈现剂量依赖性上调

doi: 10.1136/jitc-2022-006274

混合淋巴细胞反应（Mixed Lymphocyte Reaction, MLR）是一种体外实验，用于评估两种不同来源的淋巴细胞之间的免疫反应。此实验常用于评估抗体药物的免疫调节功能。常见的三种MLR实验包括：DC+T，PBMC+PBMC以及T+T。其中DC+T是评估抗体药增强T细胞应答效果的经典实验之一。免疫检查点抑制剂药物是通过阻断通路起作用，DC细胞表面大量表达PD-L1，可与T细胞表面的PD-1结合起抑制作用，若药物能有效阻断两者的反应通路，就能大量刺激T细胞增殖，从而验证药物功能活性。

• • 应用案例：纳武单抗（nivolumab）是最早被FDA批准上市的针对PD-1的人源化单克隆抗体，同时是我国首个获批上市的免疫肿瘤治疗药物。将PBMC细胞中DC和T细胞分离纯化后（DC细胞培养时需添加IL-4、GM-CSF等细胞因子），与抗PD-1抗体药物Nivolumab共培养后，ELISA测定IFN-γ等因子的分泌，3H-TdR掺入法测定T细胞的增殖。