【新品发布】Human FcγRIIIA/CD16a (V176)结合检测试剂盒(TR-FRET)

FcγRIIIA是位于自然杀伤（NK）细胞、巨噬细胞、肥大细胞等免疫细胞表面的受体，它主要通过与抗体的Fc段结合参与免疫反应。FcγRIIIA是介导ADCC效应的主要Fc受体，它能够识别并结合标记病原体、肿瘤细胞等靶标的抗体的Fc段，促使NK细胞识别并杀伤靶细胞以防御感染，起到对肿瘤免疫监视的作用。除此以外，FcγRIIIA还参与免疫耐受与调节、免疫激活和吞噬过程。

基于FcγRIIIA的功能，FcγRIIIA在抗体药物的效果中起着至关重要的作用，尤其是在单克隆抗体治疗中，许多抗体药物通过ADCC机制来增强治疗效果。例如，Rituximab（利妥昔单抗）、Trastuzumab（赫赛汀）等抗体药物通过与肿瘤细胞表面标记的抗原结合，并通过FcγRIIIA介导的ADCC效应，发挥对肿瘤细胞的细胞毒性作用。通过优化抗体的Fc段结构，增强抗体与FcγRIIIA的结合亲和力，可以提高抗体药物的效力。此外，目前已有多款靶向FcγRIIIA的在研药物正处于临床试验阶段，用于治疗肿瘤或自身免疫性疾病，这些药物大多为多靶点抗体药，不仅作用于靶细胞表面抗原，还特定作用于NK细胞表面FcγRIIIA，加强ADCC效应，有效介导靶细胞裂解。

靶向FcγRIIIA的在研药物(数据来源：药渡)

FcγRIIIA受体有两种常见的等位基因：V176和F176，它们在氨基酸序列上有所不同，具体在于第176位氨基酸的替代，这种差异影响FcγRIIIA与IgG抗体的亲和力，进而影响其介导的免疫效应。

• FcγRIIIA(V176)由于第176位的缬氨酸（Valine）具有更小的侧链体积和更好的立体匹配性，可以与IgG抗体的Fc段形成更强的结合。此外，对于依赖ADCC机制的抗体药物（如曲妥珠单抗和利妥昔单抗），V176型因其高亲和力，增强了NK细胞和其他效应细胞的功能。

• FcγRIIIA(F176) 由于苯丙氨酸（Phenylalanine）的较大侧链，可能导致与IgG Fc段的结合位点有一定的空间限制或立体冲突，从而降低了结合的紧密性。这种较低的亲和力会削弱了抗体和效应细胞的相互作用。

ADCC效应评估是抗体药早期研发过程中不可或缺的一部分，通过ADCC功能性，研究人员可一定程度上预见抗体药在体内的表现，为接下来的研究计划增砖添瓦。基于TR-FRER技术，ACROBiosystems百普赛斯成功开发了Human FcγRIIIA/CD16a (V176)结合检测试剂盒(Cat. No.FRT-07)，专门用于抗体候选药物的ADCC功能性评价，在0.5-1小时内即可完成实验，此外还可用于高通量筛选人CD16a特异性抗体和鉴定抗体药与人CD16a (V176)结合能力。一个试剂盒，多种用途尽在掌握！

Human FcγRIIIA/CD16a (V176)结合检测试剂盒(TR-FRET)的原理示意图

• 检测灵敏度高，样本可选浓度范围大

基于TR-FRET竞争法，使用Human IgG抗体和Human CD16a(V176)获得试剂盒的抑制性标准曲线。

• 基质效应低，背景影响小，结果更可靠

向稀释的缓冲液中加入不同水平的DEME、RPMI1640、FBS和HSA来验证潜在的基质效应。

使用本试剂盒分别检测了不同亚型的人IgG与人CD16a (V176)的结合活性，结果显示，人CD16a (V176)与人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4结合的亲和力较低，其中与IgG1和IgG3的亲和力高于IgG2和IgG4。

使用本试剂盒检测了4种经FDA批准的抗体药物与人CD16a (V176)结合活性。Bevacizumab和Efgartigimod alfa与人CD16a (V176) 结合为300nM到700nM水平，Eculizumab的Fc被改造设计，其铰链区为Human IgG2的铰链区，CH2-CH3区为Human IgG4的CH2-CH3区，其与人CD16a (V176)不结合，Toripalimab和CD16a (V176)不结合。

• 种属交叉反应验证

使用本试剂盒分别检测了不同亚型的小鼠IgG与人CD16a (V176)的结合活性，包括小鼠IgG1、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b，结果如下图，人CD16a (V176)几乎不与小鼠IgG1、小鼠IgG2a和小鼠IgG2b等抗体结合。

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Human FcγRIIIA/CD16a (V176)结合检测试剂盒试用活动

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参考文献：

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[2].Bruhns, P., Iannascoli, B., England, P., Mancardi, D. A., Fernandez, N., Jorieux, S., & Daëron, M. (2009). Specificity and affinity of human Fcgamma receptors and their polymorphic variants for human IgG subclasses. Blood, 113(16), 3716–3725. https://doi.org/10.1182/blood-2008-09-179754

[3].Van Coillie, J., Schulz, M. A., Bentlage, A. E. H., de Haan, N., Ye, Z., Geerdes, D. M., van Esch, W. J. E., Hafkenscheid, L., Miller, R. L., Narimatsu, Y., Vakhrushev, S. Y., Yang, Z., Vidarsson, G., & Clausen, H. (2022). Role of N-Glycosylation in FcγRIIIa interaction with IgG. Frontiers in immunology, 13, 987151. https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.987151

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