抗“炎”新势力：OX40/OX40L引领AD治疗新方向

特应性皮炎（Atopic Dermatitis, AD）是一种影响广泛的慢性炎症性皮肤病，其特征为皮肤干燥、剧烈瘙痒和湿疹样皮损。AD的发病机制复杂，涉及皮肤屏障功能障碍、免疫系统失调和皮肤微生物群失衡。恢复屏障功能、抑制或调节炎症反应成为AD治疗的主要方向。随着对AD发病机制的深入研究，针对多个靶点的生物制剂与小分子药物正处于持续研发之中，其中OX40/OX40L通路因其在AD病理生理学中的关键作用而备受关注。

OX40/OX40 Ligand信号通路在AD的病理生理学中扮演着关键角色。OX40，作为肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族成员，主要在活化的T细胞和Tregs细胞表面表达，而其配体OX40L在APCs上表达，属于肿瘤坏死因子（TNF）超家族。这一信号通路通过激活PI3K-PKB/AKT、NFAT和NF-κB等途径，增强TCR信号，促进T细胞的活化和增殖。一项研究表明，在AD中OX40阳性T细胞在病变皮肤中的数量显著增加，与非病变皮肤相比可多达10倍，显示其在AD中的重要性。

OX40/OX40L信号通路在AD中的作用

OX40信号在AD的急性期可能参与Th2型炎症反应，加剧皮肤屏障破坏和瘙痒。在慢性期，它可能促进致病性T细胞的存活，改变角质形成细胞分化，导致皮肤增厚。因此，OX40信号与局部和全身炎症、致病性T细胞的扩增、分化、存活以及T细胞记忆形成有关，推动AD的慢性病程。阻断OX40/OX40Ligand通路可减轻自身免疫性疾病中的免疫活性，使其成为治疗AD等自免疾病的潜在靶点。>>>相关阅读：经MALS验证的TNFSF三聚体蛋白

除肿瘤治疗外，OX40/OX40L是国内外药企积极布局的自免疾病靶点，在AD领域进展较快，多款取得积极临床结果，其中Rocatinlimab、Amlitelimab领跑。

Rocatinlimab是一种抗OX40单抗，用于治疗中度至重度AD、中度至重度不受控制的哮喘、结节性痒疹等，可抑制和减少负责驱动炎症反应的表达OX40的致病性T细胞数量。Rocatinlimab最初由协和发酵麒麟研发，2021年安进斥资12.5亿美元获得其日本外全球市场的权益。

III期HORIZON试验数据显示，Rocatinlimab单药治疗成人中度至重度AD取得积极结果，达成双主要终点。第24周时，Rocatinlimab组患者达到vIGA-ADTM评分0（皮肤症状清除）或1（皮肤症状几乎清除）比例为19.3%，显著高于安慰剂组的6.6%。同时，Rocatinlimab组达到湿疹面积和严重度指数较基线减少75%（EASI-75）的患者比例为32.8%，也显著高于安慰剂组的13.7%。

HORIZON试验设计

• Amlitelimab

Amlitelimab是一种非耗竭性OX40L单抗，阻断T细胞活化过程，恢复免疫系统的稳态，有效治疗AD而不清除免疫细胞。2021年赛诺菲斥资14.5亿美元收购原研公司Kymab将Amlitelimab纳入囊中，认为其有潜力成为重磅药物。

II期STREAM-AD研究表明，Amlitelimab能持续降低AD患者的生物标志物，效果在停药后及继续治疗至52周的患者中保持稳定。在一项多国2a期研究中，Amlitelimab显示出良好的耐受性和显著的疗效，改善了患者的VIGA和EASI评分，证实了其治疗AD的潜力。

2024年9月，Amlitelimab在中国启动了III期临床研究，针对12岁及以上中重度AD患者，并获批治疗重度斑秃。

在第24周重新随机分配至继续或停止Amlitelimab治疗的患者第52周应答维持情况（A）IGA 0/1应答，(B)EASI-75应答

创响生物的OX40靶向单抗IMG-007在治疗AD的IIa期临床研究中取得了积极结果。这款非耗竭性抗OX40单抗以独特方式作用于OX40，不清除T细胞，且具有较长的半衰期，展现出成为同类最佳药物的潜力。IMG-007在预期有效剂量下显示出低药物清除率和约31天的半衰期，这可能使其在AD治疗中实现每12周一次的给药频率，大幅降低与T细胞耗竭相关的安全风险。

GBR 830是一种针对活化T细胞上OX40的单抗，用于治疗AD等T细胞介导的疾病。在一项2a期研究中，中重度AD患者随机接受GBR 830或安慰剂治疗，以评估其安全性和疗效。结果显示，GBR 830治疗组达到EASI 50或以上的ITT受试者比例显著高于安慰剂组。此外，GBR 830治疗后，皮损中Th1（IFN-γ/CXCL10）、Th2（IL-31/CCL11/CCL17）以及Th17/Th22（IL-23p19/IL-8/S100A9/S100A12）的mRNA表达显著降低，显示出其在调节免疫反应方面的潜力。

治疗后定量 RT-PCR mRNA 表达的变化

除了OX40/OX40L通路外，AD的治疗还涉及其他多个通路，包括IL-4/IL-13、IL-31、IL-22和TSLP等通路的抑制剂。例如，Dupilumab（度普利尤单抗）是首个获批用于AD的IL-4Rα单抗，通过阻断IL-4和IL-13信号通路，减轻Th2型炎症并改善皮肤屏障。Rademikibart是下一代IL-4Rα抑制剂，在临床试验中显示出更高的疗效和较少的副作用。Nemolizumab针对IL-31，有效缓解AD患者的瘙痒症状，已在日本获批用于治疗AD相关的瘙痒。IL-22通过促进角质形成细胞增殖并抑制皮肤屏障相关蛋白的表达，使AD症状加重。Temtokibart阻断IL-22信号传导，有助于恢复皮肤屏障功能。Bosakitug则通过抑制TSLP减少皮肤炎症。

JAK-STAT通路也在AD中扮演重要角色，影响皮肤屏障功能和免疫反应。JAK抑制剂如阿布昔替尼和乌帕替尼在AD治疗中效果显著，尽管存在心血管风险的潜在安全性问题。ICP-332作为新型口服TYK2抑制剂，TYK2也是JAK家族成员之一，ICP-332对IL-23/Th17轴中的关键信号分子有抑制作用，为AD治疗提供了新的方向。>>>热门产品：白介素家族重组蛋白

结论

随着生物制剂的快速发展，AD的治疗已进入了新的时代。OX40/OX40L通路的发现和研究为AD的治疗提供了新的策略和希望。

为了满足市场对OX40及OX40L相关药物的研发需求，ACROBiosystems百普赛斯开发优化了一系列相关产品，包括高质量靶点蛋白；OX40:OX40L抑制性筛选试剂盒；OX40/OX40L过表达细胞株以及OX40报告基因细胞株。这一系列产品可满足从免疫、抗体筛选和表征、细胞功能验证、信号通路研究到后期的生产质控全流程，协助加速AD等多种疾病药物的研发。

更多相关产品：

• OX40 Ligand蛋白天然结构及高纯度（＞95%）经SEC-MALS验证

The purity of Human OX40 Ligand Protein, His Tag (Cat. No. OXL-H52Q8) is more than 95% and the molecular weight of this protein is around 60-80 kDa verified by SEC-MALS.

• OX40与抗体的结合活性经ELISA验证

Immobilized Human OX40 Protein, His Tag (Cat. No. OX0-H5224) at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-Human OX40 Antibody, Human IgG1 with a linear range of 0.1-2 ng/mL (Routinely tested).

Loaded Anti-OX40 MAb(Human IgG1) on AHC Biosensor, can bind Human OX40 Protein, His Tag (Cat. No. OX0-H5224) with an affinity constant of 6.03 nM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).

• OX40 Ligand与OX40的结合活性BLI验证

Loaded Biotinylated Human OX40, Avitag,His Tag (Cat. No. TN4-H82E4) on SA Biosensor, can bind Human OX40 Ligand Protein, His Tag (Cat. No. OXL-H52Q8) with an affinity constant of 0.127 nM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).

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• 使用抑制剂筛选试剂盒筛选中和抗体

INHIBITION OF OX40[Biotinylated]: OX40 Ligand BINDING BY ANTI-OX40 NEUTRALIZING ANTIBODY

Serial dilutions of Anti-OX40 Neutralizing antibody (Catalog # EP162-C04) (1:1 serial dilution, from 2μg/mL to 0.001μg/mL) was added into OX40[Biotinylated]: OX40 Ligand binding reactions. The assay was performed according to the protocol described below. Background was subtracted from data points prior to log transformation and curve fitting (QC tested).

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• OX40L过表达细胞株活性验证-FACS

FACS assay shows that Biotinylated Human OX40, Avitag,His Tag (Cat. No. TN4-H82E4) can bind to HEK293/Human OX40 Ligand / TNFSF4 Stable Cell Line (Cat. No. CHEK-ATP054). HEK293/Human OX40 Ligand / TNFSF4 Stable Cell Line was red line, Negative control HEK293 cells was grey line (QC tested).

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• 使用功能细胞株（Cat. No.CHEK-ATF135）筛选OX40L中和抗体

经验证，抗OX40L中和抗体可抑制OX40L蛋白诱导的报告基因活性，EC50值为0.025 μg/mL

Inhibition of human OX40 ligand protein-induced reporter activity by anti-human OX40 ligand neutralizing antibody.

This reporter cell was incubated with serial dilutions of antibodies in the presence of human OX40 ligand protein with a final concentration of 0.02 μg/mL. The EC50 of anti-human OX40 ligand neutralizing antibody (Amlitelimab) was approximately 0.025 μg/mL.

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经Signaling Bioassay验证，用连续稀释的OX40L蛋白刺激，EC50值约为0.0106 μg/mL，最大诱导倍数约为12.04。

Response to human OX40 ligand protein (RLU).

The Human OX40 (Luc) HEK293 Reporter Cell was stimulated with serial dilutions of human OX40 ligand protein. The EC50 was approximately 0.0106 μg/mL.

Response to human OX40 ligand protein (FOLD).

The Human OX40 (Luc) HEK293 Reporter Cell was stimulated with serial dilutions of human OX40 ligand protein. The max induction fold was approximately 12.04.

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参考文献：

1.Guttman-Yassky E, Croft M, Geng B, Rynkiewicz N, Lucchesi D, Peakman M, van Krinks C, Valdecantos W, Xing H, Weidinger S. The role of OX40 ligand/OX40 axis signalling in atopic dermatitis. Br J Dermatol. 2024 Sep 18;191(4):488-496. doi: 10.1093/bjd/ljae230. PMID: 38836560.

2.Driving Long-Term Growth: Rocatinlimab and UPLIZNA® Update. Retrieved September 25, 2024 from https://investors.amgen.com/static-files/a7119a35-06de-497e-ba75-146404c54d95

3.Weidinger S, . Phase 2b randomized clinical trial of amlitelimab, an anti-OX40 ligand antibody, in patients with moderate-to-severe atopic dermatitis. J Allergy Clin Immunol. 2024 Nov 8:S0091-6749(24)01175-8.

4.Guttman-Yassky E, Pavel AB, Zhou L, Estrada YD, Zhang N, Xu H, Peng X, Wen HC, Govas P, Gudi G, Ca V, Fang H, Salhi Y, Back J, Reddy V, Bissonnette R, Maari C, Grossman F, Wolff G. GBR 830, an anti-OX40, improves skin gene signatures and clinical scores in patients with atopic dermatitis. J Allergy Clin Immunol. 2019 Aug;144(2):482-493.e7. doi: 10.1016/j.jaci.2018.11.053. Epub 2019 Feb 6. PMID: 30738171.