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【精准 便捷】基于流式细胞术的T细胞激活检测
发布日期：2025-04-21
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随着CAR-T细胞疗法在癌症治疗中的不断突破，深入了解并准确评估T细胞的激活状态，已成为细胞治疗研发中的关键一环。研究表明，激活后的T细胞具备更强的肿瘤识别与杀伤能力，能够显著提升治疗效果（Maude et al., 2014）。
在激活状态下，T细胞会释放细胞毒性分子（如穿孔素、颗粒酶）以及多种效应细胞因子（如IFN-γ、TNF-α），从而诱导肿瘤细胞发生凋亡。激活后的T细胞不仅在体内表现出更长的生存时间，还能维持其功能性，有助于清除残留肿瘤细胞，降低复发风险。在这一过程中，共刺激信号分子（如CD28、4-1BB等）发挥着重要作用。它们能够增强T细胞的激活程度，促进增殖，并诱导形成功能持久的记忆T细胞，从而提升体内的抗肿瘤持续性（Sadelain et al., 2013）。
因此，建立完善的T细胞状态评估体系，不仅是提升细胞治疗产品质量的关键步骤，也为疗效预测和临床转化提供了有力支撑。高质量、灵敏可靠的检测方案，将成为细胞疗法研发过程中的重要保障。
激活的T细胞需要实时监测以确认其激活状态。流式细胞术（Flow Cytometry）作为一种高效、灵敏的多参数检测技术，在T细胞激活检测中发挥着不可替代的作用。流式细胞术能够同时检测多个细胞表面和细胞内标志物，提供单细胞水平的高通量分析。通过流式细胞术，研究人员可以精确评估T细胞的激活状态、增殖能力、细胞因子分泌及细胞毒性功能。
常用于流式细胞检测的激活标志物包括：
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CD69：细胞表面糖蛋白CD69是T细胞活化后上调的最早标志物之一。CD69的表达通常在T细胞活化后1-2小时内开始，并在24小时内达到峰值。当T细胞识别肿瘤抗原后，CD69会迅速上调，表明T细胞已被激活并进入效应状态。但由于24小时后CD69会下降，因此，当直接进行体外研究而不进行体外再刺激时，使用CD69评估T细胞激活可能会低估体内活化T细胞的比例。
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CD25：CD25是白细胞介素-2受体（IL-2R）的α链，与IL-2Rβ链和γ链共同组成高亲和力的IL-2受体复合物。IL-2是T细胞生长和存活的关键细胞因子，通过与IL-2R结合，促进T细胞的增殖、分化和功能维持。CD25的表达在T细胞激活后迅速上调，通常在T细胞受到抗原刺激（如通过TCR或CAR识别抗原）后4-6小时内即可检测到CD25的表达。CD25的表达在激活后24-48小时达到峰值，此时T细胞进入高度活化状态，开始大量分泌IL-2并表达高亲和力的IL-2受体。CD25的表达可以维持数天至数周，具体时间取决于激活信号的强度、共刺激信号的存在以及细胞因子的微环境。
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HLA-DR：HLA-DR（人类白细胞抗原-DR）是主要组织相容性复合体II类（MHC-II）分子的一种，HLA-DR的表达是T细胞完全激活的标志之一，表明T细胞已进入效应状态。HLA-DR的表达通常在T细胞激活后24-48小时开始上调。与早期激活标志物（如CD69和CD25）相比，HLA-DR的表达相对较晚。HLA-DR的表达在T细胞激活后3-5天达到峰值。此时，T细胞处于高度活化状态，并表现出强烈的效应功能（如细胞因子分泌和细胞毒性）。HLA-DR的表达可以维持数天至数周。
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抗体性能验证
Flow cytometric analysis of Raji staining with PE-Labeled Monoclonal Anti-Human HLA-DR Antibody, Mouse IgG2a(L243)(Cat. No. FABm020-01) at 1:20 dilution (5 μL of the antibody stock solution corresponds to labeling of 1e6 cells in a final volume of 100 µL), compared with isotype control antibody. PE signal was used to evaluate the binding activity (QC tested).
Flow cytometric analysis of Jurkat cells staining with APC-Labeled Monoclonal Anti-Human CD3 Antibody, Mouse IgG2a (Clone: OKT3)(Cat. No. CDE-AHFP1) at 1:50 dilution (2μL of the antibody stock solution corresponds to labeling of 1e6 cells in a final volume of 100 µL), compared with isotype control antibody. APC signal was used to evaluate the binding activity (QC tested).
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Panel性能验证（Cat. No. ICA-A001）
Start by setting the CD45/SSC scatter plot to identify the CD45+ lymphocyte population (A). Within the CD45+ gate, use the CD3/SSC scatter plot to identify the CD3+ T cell population (B). Next, use the CD3/CD4 scatter plot to identify the CD3+CD4+ helper T cells (Th gate) (C), and the CD3/CD8 scatter plot to identify the CD3+CD8+ cytotoxic T cells (Tc gate) (D). For B cells, use the CD3/CD19 scatter plot to identify the CD3-CD19+ population (B gate) (E). Finally, set the CD3/CD16+CD56 scatter plot to assess the CD3-CD56+CD16+ NK cell population (F).
参考文献
1.Maude, S. L., Barrett, D., Teachey, D. T., et al. (2014). "Chimeric Antigen Receptor T Cells for Sustained Remissions in Leukemia." New England Journal of Medicine, 371(16), 1507-1517.
2.Sadelain, M., Brentjens, R., & Rivière, I. (2013). "Engineering T Cells to Enhance Their Function and Safety." Nature Reviews Cancer, 13(8), 525-541.
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