从传统到快速的变革——支原体检测方法比较

传统的支原体检测方法主要包括培养法与染色法：

培养法是国际药典普遍采用的“金标准”，通过在特定培养基中扩增支原体，检测其生长情况。该方法灵敏度高，可检测多种支原体，但通常需要28天左右的培养周期，费时费力，难以满足现代放行需求。

染色法通过荧光染料结合支原体DNA，在显微镜下观察特征性荧光信号。虽然时间上优于培养法（约需3天），但对操作者的技术要求高，且灵敏度有限，漏检风险较高。

近年来，随着分子生物学与自动化技术的发展，PCR法、qPCR法、数字PCR、LAMP、NGS等快速检测方法应运而生，正在逐步改变行业格局。

通过对支原体DNA的特异性序列进行扩增与检测，可在3~5小时内出结果，同时具备高灵敏度与高特异性。已经获得多个国家药典认可，如中国、欧盟和美国药典中均已收录。

qPCR法因其高效、快速、易于标准化的特点，特别适用于以下生物制剂的支原体放行检测：（1）单克隆抗体类药物（mAbs）、（2）CAR-T细胞与干细胞类治疗产品、（3）疫苗类制品（如病毒疫苗、DNA疫苗）（4）重组蛋白/酶制剂、（5）基因治疗产品（如AAV/腺病毒载体）、（6）细胞库。这些产品往往处于细胞生产、病毒培养或基因转染中，传统培养法检测周期长，无法满足短周期放行需求，因此qPCR法被视为“优先选择”甚至“唯一可行”的快速检测方案。

环介导等温扩增是一种快速且无需昂贵设备的分子扩增方法，适合现场初筛。虽然在灵敏度与特异性方面逊色于qPCR，但在资源受限的环境中具有独特优势。

数字PCR精度更高，尤其适合残留量低、背景复杂的样品，是目前研究与高端质控中的“黑科技”。

高通量测序成本较高，但能一次性检测多种微生物，并能用于未知支原体的溯源分析，是未来质量控制中的潜力股。

当前，各国药典（如USP、EP及ChP）正在逐步接受以qPCR为代表的快速支原体检测技术，作为传统方法的补充甚至替代方案，为放行检测提供更多合规选择。同时，GMP监管也日益强调“科学合理性”与“验证充分性”，鼓励企业在符合法规的前提下，采用更先进、高效的检测手段。

在此背景下，越来越多的生物制药企业正积极搭建快速检测平台与自动化系统，以实现生产流程优化与质控效率提升。此外，细胞与基因治疗等前沿治疗模式的加速发展，也推动了对快速、灵敏检测技术的迫切需求，技术创新与市场需求正在形成正向驱动循环。

破解支原体检测的放行难题，不再只是追求“可靠”，而是迈向“高效、安全、合规”的综合解决方案。支原体检测不再只是放行环节的一项检测任务，更是连接生产、研发、质量与合规的关键纽带。快速检测技术正引领行业进入“智检”时代，助力生物制药企业在质量与效率之间实现最佳平衡。

• 验证中国、欧洲及美国药典要求支原体菌种，检测灵敏度可达1 CFU/mL

对10个 mycoplasma standards（10 CFU/mL）中的每一个进行24次测试，所有测试结果均为阳性，符合或优于EP 2.6.7的要求（10 CFU/mL）。

• 特异性强，无交叉反应

与无关细胞系/菌株的交叉反应：对两种常见细胞系和四种无关菌种（肺炎链球菌，嗜酸乳杆菌，表皮葡萄球菌和芽孢杆菌）进行提取和检测，所有检测结果均为阴性。这表明该试剂盒的支原体检测不受无关细胞/菌株的影响。