让抗体更“懂你”：单B细胞抗体开发技术服务

在生物医药研发中，工具性抗体广泛应用于靶点验证、药物筛选、工艺开发以及CMC质量控制等多个关键环节，是支撑药物研发和生产的重要“工具分子”。随着生物药复杂性和监管要求的不断提升，对工具性抗体的质量、特异性和开发效率提出了更高要求。

近年来，单B细胞抗体制备技术凭借其高通量、高精度和快速响应的优势，成为制备高质量工具性抗体的重要手段。通过直接分离产生特异性抗体的B细胞并快速获取其抗体基因序列，单B技术能够在短时间内筛选出高亲和力、高特异性的抗体，显著提高了工具性抗体的开发效率与成功率，特别适用于对特异性要求极高的抗独特型抗体、分析用抗体等应用场景。

单B细胞抗体制备技术是一种快速开发单克隆抗体的新型技术，其基于流式细胞术（FACS）及其他检测分析平台完成单个B细胞的分选及抗体筛选。主要流程是通过FACS的荧光和基本光散射快速区分细胞特征从而高效地分选出目标单个B细胞，后续提取其RNA反转录得到cDNA，PCR获取不同的unique序列，筛选出的unique序列经重组可获得单克隆抗体序列，微量表达抗体并纯化后再通过ELISA及BLI等检测分析平台对抗体进行活性和亲和力分析，筛选出最佳抗体。

单B细胞抗体制备流程示意图

1. 抗原特异性B细胞分离 2. BCR扩增和克隆 3. 大规模抗体生产

过去单克隆抗体的制备主要使用的是杂交瘤和噬菌体展示技术，杂交瘤技术是使小鼠B细胞与骨髓瘤细胞融合从而获得可以无限增殖并能持续生产目标抗体的杂交瘤细胞，获得的抗体具有天然活性，但该技术时间成本巨大，通常需要大约半年时间，成功融合的杂交瘤细胞概率很低，这使得抗体发现过程冗长。另外得到的抗体具有高免疫原性，半衰期短以及批间一致性差等缺陷使得该技术并不能作为生产治疗性抗体的理想选择；噬菌体展示技术是将抗体DNA序列插入噬菌体的外壳蛋白基因中，噬菌体组装时可使抗体展示在其表面，这种展示使得噬菌体能够通过特定的配体（如抗体、受体等）与靶标发生结合，从而筛选出与靶标具有特异性相互作用的分子。该技术适用于大规模抗体库筛选，但由于得到的抗体并非B细胞表达，重链和轻链的随机组合使得抗体重链轻链无法保持天然配对，筛选出的抗体可能在体内效果不理想，另外由于噬菌体展示库中包含大量多肽，筛选过程中可能会产生非特异性结合，增加筛选的复杂性。

与杂交瘤技术和噬菌体展示技术相比，单B细胞抗体开发技术在满足这两种技术的优点的同时也弥补了它们各自的缺陷，通过该技术获得抗体能够保留抗体序列的多样性以及重轻链可变区的天然配对，利于研究人员进行抗体工程改造；在抗体制备过程中，单B技术可以实现高通量抗体筛选，无需冗长的筛选周期，更快拿到目的抗体。

单克隆抗体制备方法比较

为缩短客户的抗体开发周期、减轻研发负担，ACROBiosystems百普赛斯推出了全新抗体开发平台——单B细胞抗体开发技术平台。与传统抗体开发技术相比，我们的单B细胞技术平台不仅能实现对特定B细胞的高特异性筛选，还能够保留抗体重链和轻链的天然配对以提高抗体的亲和力和功能性。

注：在抗体开发服务完成后，我们还可提供配套的试剂盒开发服务

平台优势

单B细胞抗体开发流程：抗原制备→动物免疫及效价测定→单B细胞分选→抗体序列分析及表达鉴定→抗体小试、纯化及鉴定→抗体生产及PK Assay建立

• 靶点A抗原免疫后的单B细胞分选

左：从脾脏单细胞悬液中分选出总淋巴细胞

中：从总淋巴细胞中分选出总B淋巴细胞

右：从总B淋巴细胞中分选靶点阳性的单个B细胞

• 靶点A抗体活性鉴定（BLI平台）

共初步筛选出多个靶点A候选抗体，通过BLI平台进行抗体活性鉴定，可成功筛选出目标抗体。（仅展示部分数据）

参考文献

1.Gieselmann L, Kreer C, Ercanoglu MS, et al. Effective high-throughput isolation of fully human antibodies targeting infectious pathogens. Nat Protoc. 2021;16(7):3639-3671. doi:10.1038/s41596-021-00554-w